麻省大学陈大学的研究探索了AAV载体制造的差异显示了方法的明显赢家

麻省大学陈医学院Horae基因治疗中心的一篇论文可能会解决关于如何最好地制造用于基因治疗的腺相关病毒(AAV)载体的长期争论。这篇论文在线发表在《人类基因治疗》杂志上，描述了使用AAV基因组群体测序(AAV-GPseq)来探索由两种常见生产管道产生的载体的基因组。一种是基于人类肾细胞;另一个是关于昆虫细胞。一种方法是明显的赢家。

“我在Horae基因治疗中心的同事使用一种复杂的下一代测序方法来创建以前无法实现的载体基因组表征的详细程度，这表明在这项研究中有一个不折不扣的赢家：哺乳动物细胞中产生的载体远远优于昆虫细胞中产生的载体，“特伦斯·弗洛特医学博士，西莉亚和艾萨克·海达克教授，陈曾熙医学院院长，麻省大学陈氏医学院教务长兼常务副校长说。在我看来，昆虫细胞载体中基因组片段和未解析的终末重复序列的百分比高得令人无法接受。这是一项重要的工作，应该会影响到这个领域。

PhillipW.L.Tai博士，微生物学和生理系统助理教授，该研究的通讯作者说：“腺相关病毒载体一直处于有效和安全的基因治疗平台的最前沿。在这里，我们描述了使用下一代测序方法量化载体基因组异质性的新方法，并且我们能够证明不同的生产平台产生不同类型和丰度的非单位长度基因组。这些发现表明，关于如何生产安全有效的基因治疗载体，还有很多需要学习的地方。尽管这些类型的生物疗法有希望，但质量控制管道新技术的开发对于确保突破性药物的安全至关重要。

在过去的二十年中，AAV载体制造取得了显着的进步，以满足临床前和临床试验的大规模生产需求。此外，AAV载体的安全性和有效性已被广泛研究，世界各地的研究人员在此过程中进行了许多改进，包括选择载体生产中使用的细胞系。但是，空的AAV衣壳和含有不完整或不准确的载体基因组的颗粒的存在长期以来一直是一个令人关注的问题，因为载体中所含的治疗材料的剂量必须精确计算。空的衣壳或不完整的有效载荷可能会改变这些计算。

有几种方法可以将空衣壳与全颗粒分离，但没有一种技术可以产生不含空或部分衣壳的载体，并且完整，中间和空衣壳的确切基因组组成在很大程度上仍然是未知的。

在这项研究中，Tai博士及其同事使用AAV-GPseq测序来探索由两种常见生产管道产生的载体基因组的组成：人胚胎肾细胞中的质粒转染和果蝇昆虫细胞中的杆状病毒表达载体。结果表明，源自昆虫细胞系统制造的相同结构设计的载体比人类肾细胞生产产生的载体产生更高程度的截断和未解析物种。

“这些令人惊讶的发现为载体的功效，安全性以及如何量化和评估临床载体提供了新的线索，”Tai说。